文章目录

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 细胞实验

1.3 动物实验

1.4 流式细胞术检测细胞凋亡

1.5 RT-qPCR

1.6 蛋白印迹检测蛋白表达

1.7 双荧光素酶报告基因检测

1.8 统计学分析

2 结果

2.1 地塞米松对MC3T3-E1细胞活力的影响

2.2 地塞米松对MC3T3-E1细胞凋亡以及miR-135b和GSK3B表达的影响

2.3 miR-135b与GSK3B靶向作用关系

2.4 miR-135b对地塞米松诱导GSK3B蛋白表达的影响

2.5 miR-135b对地塞米松诱导MC3T3-E1细胞凋亡的影响

2.6 miR-135b对地塞米松诱导MC3T3-E1细胞Bax和Bcl-2水平影响

2.7 miR-135b对地塞米松诱导MC3T3-E1细胞cleaved caspase-3和cleaved caspase-9水平的影响

2.8 miR-135b降低模型大鼠股骨头组织中GSK3B蛋白表达

2.9 miR-135b恢复模型大鼠股骨头骨密度

2.1 0 miR-135b减轻股骨头组织病变

3 讨论

文章摘要:目的探究miR-135b靶向糖原合成酶激酶3B（glycogen synthase kinase 3B,GSK3B）对地塞米松诱导的成骨细胞（MC3T3-E1）凋亡的影响。方法 CCK8检测地塞米松对MC3T3-E1细胞活力的影响,筛选最适地塞米松浓度进行后续实验。流式细胞术检测细胞凋亡,RT-qPCR检测miR-135b和GSK3B表达,荧光素酶报告实验验证miR-135b和GSK3B靶向作用关系。细胞实验分为对照组（Control）、地塞米松组（Dex）、阴性对照mimics组（mimics NC）、miR-135b组、miR-135b+糖原合成酶激酶3B组（miR-135b+pc-GSK3B）。蛋白印迹检测蛋白表达。结果与对照组比较,Dex组细胞凋亡增加,并且miR-135b表达下降,GSK3B表达升高,荧光素酶报告实验显示,miR-135b和GSK3B存在靶向作用关系。与Dex组比较,miR-135b组细胞凋亡减少,同时GSK3B、Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白水平下降,Bcl-2蛋白水平升高,与miR-135b组比较,miR-135b+pc-GSK3B组细胞凋亡增加,同时GSK3B、Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白水平升高,Bcl-2蛋白水平降低。结论 miR-135b可通过靶向作用于GSK3B,抑制地塞米松诱导的成骨细胞凋亡,这一作用与其对Bax/Bcl-2表达和caspase-3/9活化的调控有关。

文章关键词:

论文分类号:R965

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